抗体查找方法
在查找抗体的时候,常常被多个抗体货号和不同的抗体信息所困扰,不知道该如何选择合适的抗体。本篇文章希望能为大家选择合适的抗体提供帮助。
一、一抗(primary antibody)的选择
1)蛋白的名称及亚型。蛋白的名称及亚型:某些蛋白具有多种不同的亚型,如Akt1、2、3,这需要在选择抗体之前确定要研究的蛋白亚型。如果抗原选择的是不同蛋白亚型共有的肽段区域,那我们需要选择可以同时识别Akt1、2、3等多个亚型的抗体。
2)磷酸化修饰位点。检测磷酸化修饰的蛋白,选择抗体时则需知道修饰位点。
3)抗体已验证的应用(如WB,IHC,IP等)。抗体一般会对抗体应用(WB,IHC,IP, ChIP,IF,Flow)进行内部验证,选择抗体时需知道客户的实验类型。
4)抗体能够识别的样本种属。抗体一般会对不同种属目标样本进行内部验证,选择抗体时需知道客户的样本来源。
5)制备抗体的抗原。抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来,其中的免疫原包括:全长蛋白、蛋白片段、多肽、全有机体(如:细菌)或细胞。
6)抗体的动物来源。一抗的动物来源多为兔(rabbit)和小鼠(mouse),如果客户已有二抗,选择抗体时需知二抗的类型。
二、二抗(secondary antibody)的选择
1)要考虑一抗的物种来源。例如:如果选择的一抗是小鼠的单/多克隆抗体,二抗则选抗小鼠的二抗anti-mouse secondary antibody。
2)二抗的选择要考虑具体的应用类型。酶联(HRP或AP偶联)二抗常用于免疫印迹和免疫组化等,荧光标记二抗则常用于免疫荧光和流式等。
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