即将迎来2020年的春节，然而，一个冰冷的代号决意要在这节日期间印下越来越深的烙印。2019-nCoV，或者称“2019新型冠状病毒”正在引起一场来势汹汹的肺炎疫情。

根据官方公布的信息，2019-nCoV属于冠状病毒中的一种，其遗传物质为正链ssRNA，基因组大小为30kb。该类病毒部分感染人，部分感染哺乳动物及鸟类。极少数情况下（如SARS、MERS）会从动物传染到人群中，并且流通状况复杂难以预测。截至目前，这种新型肺炎已被纳入乙类传染病、采取甲类管理措施。20日，国家卫健委发布动态，下发新型冠状病毒核酸检测试剂盒，要求各地加强检测，全力救治患者，及时发布确诊病例及疫情防控信息。

早期诊断是阻断病毒传播的关键。

根据世卫组织（WHO）公布的第一版《针对疑似新型冠状病毒感染造成严重急性呼吸道感染的临床处置指南》，RT-PCR是对临床样本进行诊断的首选方式。同时建议对所有可疑病例进行详细的微生物学研究，因为不排除与其他呼吸道病毒出现双重感染的可能性。目前，病毒的相关基因组信息已经在genebank(MN908947)公开，同时WHO也发布了2019-nCoV的荧光定量PCR检测指南供研究人员参考，无疑为当前诊断体系的建立奠定了坚实基础。

TOYOBO致力于为各试剂盒厂家提供高性能，高性价比的诊断试剂原料，协助客户开发有竞争力的诊断产品。

One-Step qRT-PCR探针法检测试剂盒

本试剂盒是使用了高效率逆转录酶ReverTra Ace和PCR酶Tth DNA Polymerase的两酶体系一步法荧光定量PCR试剂盒。通过将两种酶与最优化的buffer相组合，可以对微量RNA进行迅速定量。适用于对RNA病毒及低表达量mRNA的定量。同时，不易受目的基因序列的影响，可高灵敏度地检测出各种RNA。

货号：QRZ-101

                  特征

• 卓越的检测效率和灵敏度

• 特别适合多重（Multiplex）检测体系

• 完全兼容快速反应条件

• 适用于高GC、难扩增的模板

• 适用于粗提样本检测

• 含有dUTP，可进行UNG防污染

实验例

*1 纵轴RNA拷贝数为该病毒模板下能检测的最低限，只有QRZ-101能在30 copy以下的模板量下得到一致的阳性结果

*2 模板为human total RNA按10倍梯度稀释，检测β-actin基因的表达量

*3 使用3种荧光染料标记的TaqMan探针，分别进行单重及三通道同时检测，各基因检测结果依次绘制标准曲线，在同一坐标系进行比较

无论是各种病毒的最低检测限还是检测的荧光终值，QRZ-101都优于同类一步法试剂，并且在多重体系下具有和单重体系相同的检测效果。

高效率逆转录酶ReverTra Ace

本产品是基于M-MLV改良的RNA逆转录酶，与野生型相比活性高出4倍。通过引入突变降低了酶本身的RNaseH活性，并且提高了高温反应性，从而高效率进行cDNA合成。

货号：TRT-101

         特征

• 去掉了RNaseH活性，延伸性能卓越

• 优良的高温反应性

• 特别适用于RT-PCR

实验例

以检测Flu病毒为例，模板拷贝数从10¹~10⁶数量级，THUNDERBIRD^®Probe One-step qRT-PCR Kit按标准体系进行，T公司的逆转录酶从1U增加到 4U，定量效果依然到不到本试剂盒效果。

热启动TTx DNA聚合酶（具逆转录活性）

TTx DNA Polymerase是基于Tth酶改造的DNA聚合酶，相比 TaqDNA polymerase，对 GC-rich 目的片段及粗样品的扩增效率更出色，具有延伸速度快、抵抗PCR抑制剂能力强，且在Mn²⁺存在时具有逆转录活性等特点。本产品添加了热启动抗体，实现了高特异性的PCR/RT-PCR，同时可兼容快速定量仪器。

特征

• 相比Taq酶PCR灵敏度高，抗抑制能力强

• 不易受抑制物影响，可进行血液直扩

• 快速反应条件

• 有可用于冻干（无甘油）的版本

实验例

左图，使用TaqMan探针法检测不同浓度流感病毒样本。首先抽提RNA进行梯度稀释（1x10^2 ~ 1x10^8），以相同条件检测比较同类试剂盒检测灵敏度。QRT为使用TTh酶的一步法定量试剂，可见HSTTX酶在处理实际样本时效果最好。

右图，使用快速条件检测不同拷贝数（2500, 625, 156, 40, 10）的肠病毒样本。即使在10 copy的模板浓度下依然能获得真阳性结果。

重组型RNA酶抑制剂

该RNA酶抑制剂产品来源于重组型人胎盘蛋白，通过非共价结合以1:1的比率使Rnases失活，特异地抑制RNase A, B, C以及人胎盘Rnase，不可抑制的核酸酶包括Rnase T1, S1 nuclease, Aspergillus来源的Rnase以及Rnase H。

特征

• 亲和特异性与天然的Rnase抑制剂相同

• 纯度高且不含核酸酶

• 可在较广的pH范围内具有活性(pH 5-8)

实验例

通过qPCR比较不同公司RNA酶抑制剂的效果，从结果可知，使用TOYOBO RNA酶抑制剂时可得到更低的Ct值，效果与R公司相当。

UNG酶

本品为热敏型(Heat-labile) UNG酶(Uracil-DNA Glycosylase)，可以与dUTP联合使用（QRZ-101中含有）去除qPCR检测中从前序反应带来的的carry-over污染，避免因污染导致的假阳性。该酶在55℃即可完全失活，不会影响后续PCR反应。

特征

• 热敏性，完美配合一步法试剂使用

• 有可用于冻干（无甘油）的版本

实验例

左图，对比其他公司宣称的热敏性产品，50℃ 10分钟处理后，将各UNG酶与含有U的PCR产物混合后37度进行温育。只有TOYOBO的UNG在50度10分钟处理后失去活性，没有分解掉含有U的PCR产物。

右图，比较了检测肠病毒RNA时Ct值。使用TOYOBO的UNG条件时检测灵敏度没有问题，使用其他公司的产品时Ct值出现了延迟。

  高性能热启动抗体

（适用于Taq、TTh、TTx等酶）

anti-Taq high是针对Taq DNA聚合酶的单克隆中和抗体，使用抗体热启动法可以有效抑制非特异性扩增，增强PCR的特异性和灵敏度。在进入PCR循环前的预变性阶段，Taq酶的活性即被完全激活，使用起来方便快速。此外，可提供用于冻干的无甘油版本。

特征

• 可兼容Taq、Tth以及TTx酶，封闭效果好

• 使用简便，PCR反应前和聚合酶混合即可实现热启动

• 变性时间短，不影响酶在后续循环中的活性

• 有可用于冻干（无甘油）的版本

实验例

使用anti-Taq high配制Realtime PCR Master Mix（成品货号：QPK-201）通过SYBR Green法检测β-actin基因，测试其热启动性能。结果显示，即使在3个拷贝的低浓度，依然可以维持极佳的检测能力。

截至目前，进入我们视野的是不断增多的确诊和疑似病例，坚守在一线的医务工作者，各交通枢纽的检疫人员，机构、专家和媒体人士披露的信息。此外还有背后大量的研究人员，产业上下全力以赴，在为病原的鉴别、诊断和治疗付出心血。更重要的是，我们每个人都重视起来并参与其中，积极防治，协力抗争，正确科学地对待这次事件才能让病毒无处藏身。